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" x2 H2 U) V! P9 U0 J* ^: f1 A1 G* n 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
5 ]% a- [% J) VAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......5 W4 P0 f D. o7 ]6 w Y) P
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－038 m* w9 G4 F) z' h7 r8 x3 p
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
! q9 a% Y4 X b3 T8 G' w Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus 7 I4 p. I' u1 L% f) D% D, N# }
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 : U, k$ o2 u' o
1 材料与方法
) r U: l! e3 z& y" v8 \7 E1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
G: T# j$ _. R1 C表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
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表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 A |& N2 X1 I, ?
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因素+ ]) Q* G- H% W( n. S
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
8 x T1 U8 r- O! v5 U. S降解测量ρ（油）/（mg.L-1)" Y/ o7 D' b. F; n* i- a& b
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25
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1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 + {. ~4 f5 w3 P( I2 o4 J6 e
2 结果分析 Q% W7 D; O) u; Y9 H
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。 2 p$ i) c8 V( Q! {7 R% p Q
表3 4株机油降解菌形态特征
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0 z3 _* `# r* k1 c形态特征4 M- N. h( r% I5 t7 P
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菌落颜色
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( w, r8 a$ H: D _! z$ L8 D6 R菌落形态
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& R# s* v* a3 a. j$ K# M! |. X/ s N半透明，圆形+ H4 m2 k/ B" q5 ?; u6 n1 X9 I* X! {
半透明，圆形，隆起，# M/ F4 c( q; Q+ p
不透明，米粒状突起，
1 U; p3 R7 J* z5 k- E8 D$ \5 A- a# L: }9 T2 ~8 C* p
* n# L/ L$ l' |! }& U& f
光滑，有光泽# t0 f$ {# r$ q. d2 M. V
光滑，较干燥
1 F4 a3 R' {; Q, A光滑，有光泽
6 X& J# b/ H1 A, x' H较湿润) w7 h8 S) ]7 \
2 r$ h% G6 t, e' S5 }菌体形态
& E+ a# \) B2 ?- c短杆
" G/ r! j) h1 d- B' k球形1 Y' }. X' b n# I4 F! F
杆状6 D& A5 v0 M# Z6 n# o; w- ~) h
丝状* A3 n/ M( l1 f' `* Y
) p S2 G/ W2 A7 a+ P9 y
菌体大小/μm
$ R" D" w3 c# Y( s1 R+ ~（0.3-0.8)×(0.6-1.0）& k2 b; H' ^1 l% B4 Q, B6 t
Φ0.3- `- |" L4 }, n- i
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
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G
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% ]9 o2 B* l, _ a: M+ a
5 X1 M2 z. j; X5 R) u! X初步鉴定( O% a# B w4 {7 W) u
黄杆菌属! t z6 g. b" L" J; a9 w: g
微球菌属, i) p% [* ?5 ~4 j
假单胞菌属1 A* ^$ u) D( x) e
酵母菌属
2 m) t ~3 T$ R9 f; [, n @2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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3 结论 5 d9 k% |" N- F1 @
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 $ t! {1 _$ a$ P$ [" t+ \' P% V
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" y8 t; f& E9 k( Z! ^$ } 作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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发表于 2010-2-21 20:12
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