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) T9 M+ F; @# {" r 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
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- v* t& Y9 Y" u- E' k1 X' ? 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03$ V) e2 I7 O9 g1 d0 R5 h+ F3 u# o
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
+ \$ S: e" O/ V* g8 \ Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
$ e7 M8 W! y$ q, f% u3 o 近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 ( F% E+ G" H. `0 q }5 W( e( f
1 材料与方法
6 p S- I. m/ n& o1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 ' s/ s. L/ M1 b5 d6 n
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 8 j$ V, O/ L& W* s+ {6 W
5 q" R% R5 A1 K
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3 K% a3 x% P# J4 p' V7 `9 I7 u4 E2 e$ q5 T
分组号
: V! ?9 x& L$ P+ ^( R, n- l因素7 d$ T6 \5 R# `" Y* G) T. T
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
H' s V) u/ }3 K& X* s降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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14
4 P7 x5 Y, |: I1 r7 o E) b
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表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 " \# w2 `% N E3 Z, J
; b8 W* H9 A, o0 t2 s
8 S8 [; b% z% c) ^/ p! N. C7 M( }9 h5 ^: _2 H9 Y* o
" u& h8 k+ A0 E/ ?/ U" Z4 Q
分组号
: ~# M- w. R4 _+ P; h: |因素
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* v- T$ c, I* C
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
. X3 G/ }0 I" ?2 结果分析 $ M8 V* p! U! {& v
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。 4 U/ Q; W& c; Z, F5 H% G* i
表3 4株机油降解菌形态特征 ) x) |2 s) ~- R( ^& p3 a% ?2 i
9 }# w7 t+ B$ d5 L! }
: q2 ~8 u1 } n; G! b* `% e( @5 i
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形态特征) A. T8 G& \ W* C
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粉红, L# y4 R% E9 j0 j3 b& o
淡黄' V* ^& F1 R0 Q, u
淡黄
$ E. s8 p1 T: G粉红
7 }2 T! g1 \! L* m) e' I, ]# ^/ q9 O8 r
菌落形态! {1 D7 w8 P. T# j. H! Z9 V
不透明，微隆起，全缘，! a$ w) |5 v l8 e1 @4 U
半透明，圆形
# |* ~+ t: K& R: \& y$ o半透明，圆形，隆起，2 u, P3 j3 h4 E' O6 `. B
不透明，米粒状突起，
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. e0 F( k- u( }; V( B8 s4 v2 q: L# W0 i . ]4 Z g* f# f# n+ J
光滑，有光泽
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光滑，有光泽
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* z: V9 M* [' b
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短杆
# B$ O6 u, J5 a9 C, O球形
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丝状; m& B' w% M% Z
. |, b- P+ Q+ v* z
菌体大小/μm0 ^* l7 d. g! c* H0 W
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）0 a. q# n5 a, h) U
Φ0.3' V% q, C2 E8 h3 J1 i/ i
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
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革兰氏染色6 ]( ^8 `/ F: `, v8 A8 G; M
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- u, k! c, p/ z1 m& q/ CG ]* P# s- O+ Y+ H4 w
$ O* c' _ H6 p: o初步鉴定
& C$ v' m7 {+ K黄杆菌属5 o9 B/ M* |0 ~7 m* c& P) j+ I# \
微球菌属
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2 j* A/ Q: Q3 d0 G7 d酵母菌属. P1 G' I7 R( k0 a" _
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。 ) ^ |3 M3 G* I( s& |1 x) `- ]
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3 结论 4 J; Z* b0 \4 B- L, [7 A) H
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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