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/ V I; [/ L% n9 u 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
: s0 E t6 K- A$ F' q4 ^) MAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......
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9 Z4 b; @3 G9 s- n, Z5 y 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03) |, _4 z" z& ]
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 6 c4 @# r4 [! _- Y
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus % T" }% j+ A* c* r
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 ' @/ g+ \# h& u. e! _ u
1 材料与方法
; P i6 z8 W5 f' Z& Q1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
8 L/ s: q2 `$ F( n/ Z; }3 q表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
% y# R& K" w9 z+ n, g( _4 a- F0 ^, t: Y7 V9 P# T
4 ^ s3 c8 P3 h/ G% q! _; ?# q) r( P: N9 `7 d2 ]
4 s' w8 {, S. \# z1 v
分组号
- N% l% g" ^8 r, f) C F: H因素" t% E2 D: o9 i* C3 D q% N
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
- X- T- N2 ?- e- [. S/ N5 E降解测量ρ（油）/（mg.L-1)3 C; ^/ x4 F9 ^9 o/ K% F# @
6 B! `& }; B/ U1 F* o温度/. e3 Z; f# h% w, T
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, z6 i, G. R0 W( F9 f表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 6 K; X& Q4 u( r0 |; a5 `1 k
7 |# E/ r8 w7 k# S' h3 G. V
5 S/ g3 s* N9 K2 n, N3 I# B
9 [! ^/ X2 n5 G* N6 ?5 [ I3 x6 {' t3 C8 D/ S5 M; d
分组号6 J4 s8 E: ~8 k# F
因素8 A! v1 B7 |# i* j
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)8 A& G' Z0 |4 b/ b4 v( }+ P
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)# E6 H0 e, \: i- X: Z
4 x' B/ t' M1 Y+ O! }2 c温度/0 F0 a: O" D+ M, ?
ρ（油）/（mg.L-1)
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# j6 F$ R2 ^& G# f* @& I ; t7 b2 Y" x @( G: O: V
; z* f- L" F& ]/ s' ~/ o
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
& _; z- ~2 e; x- |( U$ v7 {2 结果分析 1 s6 P X/ |/ }& f( H
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。 - A* m# Q3 e, s" J, T- F
表3 4株机油降解菌形态特征 7 f5 t. { \5 s3 v! V& \: z
8 S) h) a: @; Z( g
N3 {0 H% N u& l& P4 }, F; v1 r P* l' j' E
( u3 ?! C8 d+ k* M% E
形态特征/ l' t) V, v/ K# J5 q
ZL1/ h$ P: K8 S& D7 h7 s) ^+ J5 a6 T
ZL2& C4 @/ ~' n9 `0 h; i2 t1 P+ y
ZL3
F% |; b0 x3 b8 q2 `5 GZL4& I' q4 K* V( X" n8 y5 v
8 l9 C- n8 @7 L' U菌落颜色' @$ \. }" c& h, ~* b: n% j0 q
粉红8 Z/ C- ^8 A# g( M. w7 n
淡黄7 Y: j2 C1 N1 _9 E
淡黄: V# K4 o, |7 I* ^) n/ H
粉红
) Y. z+ U2 N' {' |5 @# s; B! V% n' G2 _
菌落形态; q9 [# d; B9 M5 x- j
不透明，微隆起，全缘，$ ~" H# ^. L/ J9 H. L0 G5 n
半透明，圆形! g8 u0 ~8 `& ]8 G
半透明，圆形，隆起，
. P( z; m9 D* p; v, F1 W# ?( Y8 u+ v不透明，米粒状突起，
5 ` J6 a& y' h5 k a+ v' a7 x C# g6 i- M8 m: w
8 W! M& }3 S2 x: H6 F+ k2 l- ^
光滑，有光泽' G7 Z5 M: w( g7 p4 O+ ?+ j
光滑，较干燥
9 D9 g6 u! u* o8 e, F+ h$ Q光滑，有光泽/ U" V8 ?3 ]% j* ]& ?% G ?
较湿润
0 W6 Y4 e$ }3 V# |8 E8 d) Y. f; E E# T/ p# L8 n y! x
菌体形态
* h) n6 D. T% q. n短杆5 u1 t. n, a8 ^" p
球形
H8 Z+ Y& ]5 R% g杆状& b; y1 B% n2 C
丝状
$ v" R) q. q$ A# s. D5 p
4 ?% {8 e/ _+ X! [菌体大小/μm2 s8 m. t, E1 s4 N1 }
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）0 {# Z7 @; n `% p0 \
Φ0.36 O" R- [( _% W5 e& g; \
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
6 z! {2 S; f2 ], @( ?0.2×(6-60)
4 f* _5 @8 _! p7 z% m3 d/ c
/ ?+ K$ p$ y+ O' Q革兰氏染色4 i7 Y3 O2 y4 U2 A" O U$ F1 n
G- m3 y2 E( ?8 ~+ a$ h' _
G
: j# ^4 ?( X aG
$ K9 {& ^7 }2 X1 R" O2 CG
# t1 i. k3 ^% V- _1 D
4 w! A2 s$ [' t初步鉴定3 m( C( W3 ~6 L" A
黄杆菌属- ?/ W' Y& U7 k( f/ C
微球菌属
$ g8 {7 ?- B* u% `, y2 V假单胞菌属$ C9 H( t; a1 a% N# c m
酵母菌属
% T4 I8 B. \# E0 Z8 y# [+ _3 ^2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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2 d# Q" g2 E; w0 h3 结论 # q9 Z$ f3 `& y) g- G
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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